Msi1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404014-ACT

MSI1は、Musashi RNA結合タンパク質1（Msi1）をコードしており、標的mRNA中の配列モチーフに結合して翻訳や安定性、細胞運命決定を調節する、保存性の高い転写後制御因子です。ヒト細胞では、Msi1は幹／前駆細胞の維持を支え、NotchやWnt/β-カテニンなどの経路におけるシグナル出力、ならびに増殖や系譜コミットメントを制御するより広範なRNAプロセシングネットワークを形成することで、分化プログラムに影響を与えます。MSI1の異常発現は複数の疾患状況において増殖制御の破綻や分化障害状態と関連づけられており、腫瘍原性様の転写・翻訳回路を研究するための有用なマーカーであると同時に、機構解明の糸口にもなります。さらにRNA結合タンパク質としてのMsi1は、DNA配列を変えずに遺伝子発現を再配線しうるストレス応答や、RNAグラニュール関連の制御の研究にも重要です。

Msi1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MSI1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Msi1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MSI1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMSI1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Msi1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMSI1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMsi1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMSI1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMsi1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。