MS4A6A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417401-ACT

MS4A6Aは、膜貫通型4A（MS4A）ファミリーに属するメンバーをコードしており、このファミリーは造血系および骨髄系系譜で豊富に発現するテトラスパン様タンパク質群から成ります。MS4A6Aは、ミクログリアやマクロファージの活性化状態のマーカーとしてしばしば用いられ、自然免疫応答を形作る膜構造の組織化や、細胞表面シグナル伝達複合体の制御に関与すると考えられています。MS4A6Aの発現は炎症プログラムと連動し、免疫細胞の活性化、貪食機能、サイトカイン駆動性の転写状態に関連する経路と相関します。MS4A6A発現の変化は神経炎症関連の表現型と関連づけられており、神経変性疾患の遺伝学およびミクログリア生物学の文脈で一般的に研究されています。

MS4A6A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MS4A6Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MS4A6A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MS4A6A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMS4A6A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MS4A6Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMS4A6A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMS4A6A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMS4A6A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMS4A6A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。