MRS2L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410061

Panoramica

Il gene umano **MRS2** codifica **MRS2L**, un canale mitocondriale del Mg2+ localizzato nella membrana interna, essenziale per mantenere l’omeostasi del magnesio nella matrice, sostenere la fosforilazione ossidativa e tamponare lo stress bioenergetico. Regolando attività dipendenti dal Mg2+ come la gestione dell’ATP e la funzione degli enzimi mitocondriali, MRS2L influenza il potenziale di membrana mitocondriale, l’accoppiamento del calcio e l’equilibrio delle specie reattive dell’ossigeno. L’alterazione del trasporto ionico mitocondriale e della disponibilità di Mg2+ è implicata in difetti del metabolismo mitocondriale e delle risposte allo stress, frequentemente studiati nella neurodegenerazione, nei disturbi cardiometabolici e nell’adattamento delle cellule tumorali. MRS2L rappresenta quindi un nodo utile per indagare la segnalazione mitocondriale, la plasticità metabolica e le vie di controllo della qualità degli organelli.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MRS2L (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MRS2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MRS2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MRS2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MRS2L.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MRS2 per lo studio della segnalazione di MRS2L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MRS2 critici per la funzione di MRS2L
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MRS2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MRS2L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MRS2L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MRS2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MRS2L Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MRS2L (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MRS2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MRS2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.