MRP6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402219-ACT

ABCC6は、ATP結合カセット（ABC）トランスポーターであるMRP6をコードしており、主として肝臓と腎臓で発現する膜排出ポンプとして、細胞外のヌクレオチドおよび代謝物の恒常性を調節します。ATP放出の制御と、それに続く細胞外ピロリン酸の産生を介して、MRP6はミネラル化のバランスと結合組織の健全性に寄与し、トランスポーター活性をプリン作動性シグナル伝達およびエクトヌクレオチダーゼ経路と結び付けます。ABCC6の機能喪失や発現低下は、弾性線維性仮性黄色腫（pseudoxanthoma elasticum）や関連する遺伝性ミネラル化疾患を含む異所性石灰化の表現型と強く関連しています。こうした生物学的根拠に基づく関連性により、ABCC6は石灰化の全身性調節因子、肝臓のトランスポートネットワーク、ならびに細胞外マトリックス再構築機構を研究するうえで価値の高い標的となります。

MRP6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCC6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MRP6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCC6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCC6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MRP6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCC6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMRP6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCC6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMRP6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。