MRP4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401912-ACT

ヒトのABCC4はMRP4（多剤耐性関連タンパク質4）をコードしており、ATP結合カセット（ABC）トランスポーターとして、cAMP/cGMPなどの環状ヌクレオチド、プロスタグランジン、ロイコトリエン、胆汁酸抱合体、さらに多様な異物代謝産物を含む有機アニオンをATP依存的に細胞外へ排出します。細胞内のセカンドメッセンジャーや脂質メディエーターを制御することで、MRP4はGPCRシグナル伝達、炎症および血管の恒常性維持に関わる経路、ならびにストレスに対する細胞応答に影響を及ぼします。ABCC4の活性は、輸送に駆動されたクリアランスを通じて、ヌクレオシドアナログなどの小分子の薬物動態や細胞内曝露量にも影響します。ABCC4/MRP4の発現異常は、複数の疾患状況において炎症シグナルの変化や、トランスポーターに関連した薬物応答表現型と関連づけられており、トランスポーター生物学とシグナル伝達クロストークの機序研究に有用な標的となります。

MRP4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCC4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MRP4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCC4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCC4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MRP4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCC4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMRP4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCC4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMRP4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。