MPO/Myeloperoxidase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400822-ACT

O gene MPO humano codifica a mieloperoxidase, uma peroxidase contendo heme altamente expressa em neutrófilos e monócitos, que catalisa a conversão de peróxido de hidrogênio e haletos em ácidos hipohalosos, incluindo o ácido hipocloroso. Essa química oxidativa dá suporte à defesa imune inata, à formação de armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) e à modulação de sinalização sensível ao estado redox, o que influencia a inflamação e o remodelamento tecidual. A atividade da MPO se interconecta com vias de espécies reativas de oxigênio (ROS), a maturação do fagossomo e as interações hospedeiro–patógeno, e também pode promover a modificação oxidativa de proteínas e lipídios. A expressão ou atividade desregulada da MPO tem sido associada a distúrbios inflamatórios, aumento do risco de doença cardiovascular e fenótipos mieloides associados a tumores, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos de imunometabolismo e estresse oxidativo.

MPO/Myeloperoxidase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MPO sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MPO/Myeloperoxidase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MPO em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MPO, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MPO/Myeloperoxidase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MPO nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MPO/Myeloperoxidase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MPO/Myeloperoxidase em células tumorais com expressão de MPO silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.