MN1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404347-ACT

MN1 (meningioma 1) codifica um co-regulador transcricional que modula programas de expressão gênica envolvidos na diferenciação hematopoética e na proliferação celular. MN1 interage com redes de receptores nucleares e coativadores, influenciando o controle transcricional associado à cromatina e as saídas transcricionais específicas de linhagem. A expressão desregulada de MN1 está fortemente associada à biologia das malignidades mieloides, nas quais estados transcricionais alterados contribuem para a manutenção aberrante de progenitores e para a diferenciação prejudicada. Como regulador nuclear, MN1 é frequentemente estudado no contexto de complexos de fatores de transcrição e de circuitos de regulação gênica que moldam decisões de destino celular.

MN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MN1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MN1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MN1 em células tumorais com expressão de MN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.