MMP9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400083-ACT

O gene humano MMP9 codifica a metaloproteinase de matriz-9, uma endopeptidase secretada dependente de zinco que degrada componentes da matriz extracelular, como o colágeno tipo IV, e regula a remodelação da membrana basal. Sua atividade influencia a migração celular, a angiogênese e o tráfego de leucócitos ao moldar o ambiente proteolítico pericelular e ao liberar ou ativar fatores de crescimento e citocinas ligados à matriz. O MMP9 está integrado a redes de sinalização inflamatória e a programas de organização da matriz extracelular, e interage com vias que controlam a dinâmica epitélio–mesênquima e o reparo tecidual. A expressão e a atividade desreguladas de MMP9 são frequentemente estudadas na invasão e metástase do câncer, em distúrbios inflamatórios crônicos, na remodelação cardiovascular e na neuroinflamação.

MMP9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MMP9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MMP9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MMP9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MMP9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MMP9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MMP9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MMP9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MMP9 em células tumorais com expressão de MMP9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.