MMP-12 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401853-ACT

Das humane MMP12 kodiert die Matrix-Metalloproteinase 12 (MMP-12), eine zinkabhängige Endopeptidase, die Bestandteile der extrazellulären Matrix wie Elastin abbaut und das perizelluläre proteolytische Mikromilieu moduliert. Die Aktivität von MMP-12 greift in Programme des Umbaus der extrazellulären Matrix, der inflammatorischen Signalgebung und der Zellmigration ein und beeinflusst dadurch die Gewebearchitektur und das Leukozyten-Trafficking. Eine dysregulierte MMP-12-Expression wurde mit chronisch entzündlichen Erkrankungen und fibroseassoziiertem Remodeling in Verbindung gebracht; zudem wird MMP-12 häufig im Kontext der Dynamik des Tumormikromilieus, invasionsassoziiertem Matrixumsatz und makrophagengetriebener Pathologie untersucht.

MMP-12 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MMP12-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MMP-12 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MMP12-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MMP12-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MMP-12-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MMP12-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MMP-12-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MMP-12-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MMP12-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.