MLF1IP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-413208

概要

CENPUはセントロメアタンパク質U（MLF1IP）をコードしており、有糸分裂期に適切なキネトコア形成と微小管の安定した結合に必要なCENP-O/P/Q/U複合体の中核構成要素です。MLF1IPは染色体の正確な整列（コンゲレッション）と分配を支え、細胞周期の秩序だった進行およびスピンドルチェックポイント関連過程を通じてゲノム安定性の維持に寄与します。セントロメア／キネトコア因子の破綻や発現制御異常は、染色体の誤分配や異数性を引き起こし得るため、CENPUの機能は増殖性疾患の表現型にしばしば伴う機構と関連づけられます。有糸分裂の制御因子として、CENPUは細胞分裂制御、染色体不安定性に関わる経路、がんに関連した細胞周期リモデリングの文脈で頻繁に研究されています。

MLF1IP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCENPU遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CENPU内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CENPUのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MLF1IPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MLF1IPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CENPU欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MLF1IPの機能に不可欠なCENPUエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CENPUゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MLF1IP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMLF1IP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CENPU遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MLF1IP HDRプラスミド（h）および MLF1IP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCENPUホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCENPU標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。