MLF1IP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413208
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- MLF1IP Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im MLF1IP-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MLF1IP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-413208 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
CENPU kodiert das Zentromerprotein U (MLF1IP), einen zentralen Bestandteil des CENP‑O/P/Q/U‑Komplexes, der für die korrekte Kinetochorassemblierung und eine stabile Mikrotubuli-Anheftung während der Mitose erforderlich ist. MLF1IP unterstützt die präzise Ausrichtung (Kongression) und Segregation der Chromosomen und trägt so durch einen geordneten Ablauf des Zellzyklus sowie spindelkontrollpunktassoziierte Prozesse zur Aufrechterhaltung der genomischen Stabilität bei. Eine Störung oder Fehlregulation von Zentromer-/Kinetochorfaktoren kann zu Chromosomenfehlverteilung und Aneuploidie führen und verknüpft die Funktion von CENPU mit Mechanismen, die häufig mit proliferativen Krankheitsphänotypen assoziiert sind. Als mitotischer Regulator wird CENPU häufig im Kontext der Kontrolle der Zellteilung, von Signalwegen der chromosomalen Instabilität und des krebsassoziierten Umbaus der Zellzyklusregulation untersucht.
Das MLF1IP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CENPU-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CENPU-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CENPU nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MLF1IP-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CENPU-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MLF1IP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf CENPU-Exone abzielen, die für die MLF1IP-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere CENPU-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom MLF1IP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MLF1IP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CENPU-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MLF1IP HDR-Plasmid (h) und MLF1IP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CENPU-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CENPU-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.