MK Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402064-ACT

O MDK humano codifica a midquina (MK), um fator de crescimento secretado e ligante de heparina que modula a proliferação, a sobrevivência, a migração celular e respostas angiogênicas durante o desenvolvimento e a remodelação tecidual. A sinalização de MK interage com vias mediadas por receptores tirosina-quinase e por proteoglicanos, influenciando os programas a jusante MAPK/ERK, PI3K/AKT e transcricionais inflamatórios que moldam a dinâmica da matriz extracelular e a comunicação célula–célula. A expressão desregulada de MDK foi relatada em diversos tipos de câncer e em inflamação patológica, respostas a lesão isquêmica e remodelação fibrótica, nas quais pode afetar as interações tumor–estroma e o recrutamento de células imunes. Como regulador dependente do contexto da biologia de estresse e reparo, o MDK é amplamente estudado em modelos de oncogênese, neurobiologia e biologia vascular.

MK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MDK sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MDK em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MDK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MDK nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MK em células tumorais com expressão de MDK silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.