MITF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m2): sc-421654-KO-2

概要

Mitf は、小眼球症関連転写因子（microphthalmia-associated transcription factor：MITF）をコードする遺伝子であり、メラノサイトおよび関連する神経堤由来細胞種における系譜決定と分化プログラムを統括する、塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス／ロイシンジッパー（bHLH-LZ）型の転写調節因子です。MITF は、色素形成、メラノソーム生合成、細胞周期の進行、細胞生存を制御する転写ネットワークを統括し、MAPK/ERK や cAMP/CREB 経路などのシグナル入力を統合します。マウスモデルでは、Mitf 活性の変化がメラノサイトの発生、色素表現型、さらには肥満細胞における免疫関連機能にも影響し、本遺伝子はメラニン生成や系譜可塑性の機構研究と結び付けられています。MITF 依存性プログラムの破綻（ディスレギュレーション）は、分化状態のスイッチングやストレス応答など、メラノーマ生物学に関連する経路を検証するために広く利用されています。

MITF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）は、mouse細胞株におけるMitf遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mitf内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mitfのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MITFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MITFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mitf欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MITFの機能に不可欠なMitfエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mitfゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MITF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMITF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mitf遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MITF HDRプラスミド（m）および MITF HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMitfホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMitf標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。