Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MISR II Double Nickase Plasmid (h): sc-402523-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MISR II Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MISR II Double-Nickase-Plasmid (h) und MISR II Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AMHR2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MISR II: sc-377413
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MISR II Double Nickase Plasmid (h) | sc-402523-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MISR II Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402523-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMHR2 (MISR II) kodiert den Anti-Müller-Hormon-Rezeptor Typ II, eine transmembrane Serin/Threonin-Kinase, die nach Bindung von AMH die Signalübertragung initiiert. Nach Ligandenbindung rekrutiert MISR II Typ‑I‑Rezeptoren und aktiviert die Phosphorylierung von SMAD1/5/8, was nachgeschaltete Transkriptionsprogramme auslöst, die die Regression der Müller-Gänge und allgemeinere Differenzierungsprozesse reproduktiver Gewebe regulieren. In humanen Zellen steht die AMHR2-Aktivität in Wechselwirkung mit Entwicklungs- und endokrinen Signalwegen, die die Gonadenfunktion und die Biologie des Reproduktionstrakts prägen. Eine fehlregulierte AMHR2-Expression oder -Signalgebung wurde mit Störungen der Geschlechtsentwicklung in Verbindung gebracht und im Kontext von Granulosazelltumoren des Ovars sowie weiteren Pathologien des Reproduktionssystems untersucht.
MISR II Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AMHR2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AMHR2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AMHR2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AMHR2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.