Plasmide CRISPR/Cas9 KO MGMT (m): sc-421647

Présentation

Le gène murin **Mgmt** code l’**O6-méthylguanine-ADN méthyltransférase (MGMT)**, une enzyme de réparation directe de l’ADN qui élimine les adduits alkyles en position O6 de la guanine en transférant la lésion sur une cystéine du site actif lors d’une réaction « suicide » à usage unique. Cette activité s’oppose à la mutagénèse et au stress réplicatif issus de dommages alkylants endogènes et environnementaux, et s’inscrit dans des programmes de maintien du génome qui influencent le traitement par la réparation des mésappariements et la signalisation des points de contrôle du cycle cellulaire. Les altérations de la fonction ou de l’expression de MGMT sont largement étudiées dans des contextes d’instabilité génomique induite par l’alkylation et de biologie tumorale, où la capacité de réparation de l’ADN peut façonner les spectres mutationnels et les réponses cellulaires au stress. Chez la souris, **Mgmt** constitue un système accessible pour étudier les voies de réponse aux dommages de l’ADN, la biologie de la réparation spécifique aux tissus, et les mécanismes reliant les lésions d’alkylation à la carcinogenèse ainsi qu’à des modèles de neurotoxicité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MGMT (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mgmt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mgmt, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mgmt à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MGMT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mgmt pour l'étude de la signalisation de MGMT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mgmt essentiels à la fonction de MGMT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mgmt pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MGMT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MGMT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mgmt. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MGMT plasmide HDR (m) et le MGMT (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mgmt pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mgmt définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.