Mfn2/Mitofusin 2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400536-NIC

MFN2 codifica a GTPase da membrana mitocondrial externa Mitofusina 2 (Mfn2), um mediador central da fusão mitocondrial e da remodelação da rede mitocondrial, ajudando a manter a integridade do DNA mitocondrial, o potencial de membrana e a capacidade de fosforilação oxidativa. Para além da fusão, a Mfn2 contribui para os sítios de contacto entre o retículo endoplasmático e as mitocôndrias (MAMs), modulando a transferência de Ca²⁺, a troca de lípidos e vias de sinalização de stress que coordenam o metabolismo celular e a apoptose. A atividade de MFN2 cruza-se com programas de controlo de qualidade mitocondrial, incluindo a mitofagia e a resposta integrada ao stress, ligando a dinâmica dos organelos à adaptação bioenergética. A desregulação da função de MFN2 está implicada em neurodegeneração e neuropatia periférica, sendo também frequentemente estudada em contextos de disfunção cardiometabólica, nos quais alterações da morfologia e da sinalização mitocondrial acompanham o stress celular.

Mfn2/Mitofusin 2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MFN2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MFN2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MFN2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MFN2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.