Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Mfn1/Mitofusin 1 Double Nickase Plasmid (m): sc-426545-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Mfn1/Mitofusin 1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Mfn1/Mitofusin 1 Double-Nickase-Plasmid (m) und Mfn1/Mitofusin 1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Mfn1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Mfn1/Mitofusin 1: sc-166644
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mfn1/Mitofusin 1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-426545-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mfn1/Mitofusin 1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-426545-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Mfn1** kodiert **Mitofusin 1**, eine dynaminverwandte GTPase, die in die äußere Mitochondrienmembran eingebettet ist und die Annäherung (Tethering) und Fusion von Mitochondrien antreibt. **MFN1** koordiniert die Architektur des mitochondrialen Netzwerks, unterstützt die Effizienz der oxidativen Phosphorylierung und trägt über Signalwege der mitochondrialen Dynamik zur Erhaltung der mitochondrialen DNA sowie zur Anpassung an Stress bei. Seine Aktivität überschneidet sich mit Qualitätskontrollprozessen wie Mitophagie und apoptotischer Signalgebung, indem es Membranpotenzial, Crista-Organisation und die Kommunikation zwischen Organellen beeinflusst. Eine Fehlregulation der MFN1-gekoppelten Fusion ist mit veränderter Bioenergetik verbunden und wird häufig im Kontext von Neurodegeneration, kardiometabolischer Dysfunktion und Zustandsübergängen von Krebszellen untersucht, bei denen mitochondrialer Umbau den Phänotyp prägt.
Mfn1/Mitofusin 1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Mfn1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Mfn1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Mfn1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Mfn1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.