Mfn1/Mitofusin 1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-426545-NIC

O gene Mfn1 de camundongo codifica a mitofusina 1, uma GTPase relacionada à dinamina, inserida na membrana externa da mitocôndria, que promove o ancoramento e a fusão mitocondrial. A MFN1 coordena a arquitetura da rede mitocondrial, sustenta a eficiência da fosforilação oxidativa e contribui para a manutenção do DNA mitocondrial e para a adaptação ao estresse por meio de vias de dinâmica mitocondrial. Sua atividade se cruza com processos de controle de qualidade, como a mitofagia e a sinalização de apoptose, ao influenciar o potencial de membrana, a organização das cristas e a comunicação entre organelas. A desregulação da fusão mediada por MFN1 está associada a alterações na bioenergética e é frequentemente estudada no contexto de neurodegeneração, disfunção cardiometabólica e transições de estado em células cancerosas, nas quais o remodelamento mitocondrial impacta o fenótipo.

Mfn1/Mitofusin 1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Mfn1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Mfn1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Mfn1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Mfn1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.