MetRS CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402763-ACT

ヒトのMARSはメチオニルtRNA合成酵素（MetRS）をコードしており、開始tRNA^Metおよび伸長tRNA^Metにメチオニンを結合させるクラスIのアミノアシルtRNA合成酵素である。これにより翻訳開始が成立し、全体的なタンパク質合成が維持される。MetRS活性はアミノ酸の利用可能性をリボソームの産出量やプロテオスタシスと結び付け、翻訳能への影響を通じて、統合的ストレス応答（ISR）やmTORに連動した栄養シグナル伝達などのストレス応答に影響する。細胞質翻訳装置の中核因子として、MARSの発現や機能の変化は、プロテオーム不均衡を介して細胞の増殖プログラムやミトコンドリア／小胞体（ER）の恒常性を乱し、アミノ酸欠乏に対する適応応答にも影響を及ぼし得る。アミノアシルtRNA合成酵素を含む翻訳関連因子の調節異常は、翻訳制御が細胞状態を規定するという観点から、神経発達表現型、がん細胞の適応度、炎症性シグナル伝達などの文脈でしばしば研究されている。

MetRS CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MARSの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MetRS CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MARS 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMARS転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MetRSの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMARS遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMetRS依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMARS発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMetRS経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。