melanotransferrin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404111-ACT

ヒトMELTFは、膜結合性の鉄結合性糖タンパク質であるメラノトランスフェリンをコードしており、細胞内の鉄の取り扱いおよびトランスフェリン関連の輸送に関与すると考えられています。金属輸送にとどまらず、メラノトランスフェリンは細胞接着、遊走、エンドサイトーシス過程の制御とも関連づけられており、膜動態や細胞外相互作用を形作る経路とのつながりが示唆されています。MELTF発現の変化は、がん生物学や神経炎症など、複数の疾患関連コンテキストで報告されており、これらの場面では鉄恒常性や細胞運動プログラムの変化がしばしば観察されます。さらに、細胞表面に存在する分子として、メラノトランスフェリンはヒト細胞モデルにおける表現型の不均一性を解析するためのマーカーとしても用いられます。

melanotransferrin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MELTFの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

melanotransferrin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MELTF 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMELTF転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性melanotransferrinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMELTF遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるmelanotransferrin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMELTF発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるmelanotransferrin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。