MEK kinase-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403653-ACT

MAP3K2 kodiert die MEK-Kinase 2, eine MAP-Kinase-Kinase-Kinase (MAP3K), die vorgelagerte Stress- und Zytokinsignale in nachgeschaltete MAPK-Kaskaden weiterleitet. MEK-Kinase 2 integriert Signale von Rezeptoren und kleinen GTPasen, um die Signaloutputs von ERK, JNK und p38 zu modulieren, und formt dadurch Transkriptionsprogramme, die Proliferation, Differenzierung, Migration und Entzündungsreaktionen steuern. Aufgrund ihrer Rolle in der Dynamik des MAPK-Netzwerks und der signalabhängigen Genexpression wird MAP3K2 häufig im Kontext onkogener Signalwege, Immunregulation und zellulärer Anpassung an Stress untersucht. Eine dysregulierte Signalwegaktivität unter Beteiligung von MAP3K2 wurde mit einer veränderten Responsivität auf Wachstumsfaktoren und entzündungsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die mechanistische Krankheitsforschung relevant sind.

MEK kinase-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAP3K2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MEK kinase-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAP3K2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAP3K2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MEK kinase-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAP3K2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MEK kinase-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MEK kinase-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAP3K2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.