MEF-2A Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400484-LAC

MEF2A codifica il fattore di trascrizione MEF-2A, un regolatore della famiglia MADS-box/MEF2 che integra segnali calcio-dipendenti e input MAPK per controllare programmi genici che governano la miogenesi, la differenziazione neuronale, il rimodellamento sinaptico e le risposte cellulari allo stress. L’attività di MEF-2A è modulata da modifiche post-traduzionali e da interazioni con cofattori, collegandola al rimodellamento della cromatina e alla trascrizione dipendente dagli stimoli nelle linee muscolari, immunitarie e neurali. Alterazioni dell’espressione di MEF2A o del suo controllo regolatorio sono state associate alla biologia vascolare e alla funzione cardiaca, e una più ampia disregolazione della via MEF2 è implicata in contesti neuroevolutivi e neurodegenerativi. In quanto nodo di reti trascrizionali dipendenti da CREB/HDAC e dalla calcineurina, MEF-2A è spesso studiato per il suo ruolo nella specificazione di linea, nell’adattamento metabolico e nell’espressione genica dipendente dall’attività.

Le particelle di attivazione lentivirale MEF-2A (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MEF2A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MEF-2A (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MEF2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MEF-2A. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MEF2A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.