ME3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417146

Visão geral

O ME3 humano codifica a enzima málica mitocondrial dependente de NADP, que catalisa a descarboxilação oxidativa do malato em piruvato com produção concomitante de NADPH. Ao conectar o ciclo do ácido tricarboxílico ao controle redox mitocondrial, o ME3 fornece poder redutor para biossíntese, defesa antioxidante e flexibilidade metabólica diante de mudanças nas condições de nutrientes. A atividade de ME3 influencia vias envolvidas em anaplerose/cataplerose, tamponamento de espécies reativas de oxigênio e função mitocondrial, tornando-o relevante para estudos de remodelamento metabólico e estresse redox. Alterações na expressão de ME3 ou na dependência dessa enzima têm sido investigadas em contextos nos quais o balanço mitocondrial de NADPH e o metabolismo oxidativo contribuem para fenótipos associados a doenças, incluindo o metabolismo do câncer e a disfunção mitocondrial.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ME3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ME3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ME3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ME3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ME3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ME3 para a investigação da sinalização de ME3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ME3 críticos para a função ME3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ME3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ME3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ME3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ME3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ME3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ME3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ME3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ME3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.