MDC1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405652-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MDC1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MDC1 Double Nickase Plasmid (h) e il MDC1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MDC1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MDC1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405652-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MDC1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405652-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il mediatore del checkpoint del danno al DNA 1 (MDC1) è una proteina impalcatura associata alla cromatina che amplifica la segnalazione delle rotture a doppio filamento del DNA legandosi a H2AX fosforilata (γH2AX) e coordinando il reclutamento di fattori di riparazione e di checkpoint. Attraverso interazioni con eventi di fosforilazione dipendenti da ATM e con moduli di segnalazione dell’ubiquitina, MDC1 favorisce l’assemblaggio di 53BP1 e dei componenti della via BRCA1, influenzando la scelta del percorso tra giunzione delle estremità non omologhe (NHEJ) e ricombinazione omologa (HR). La funzione di MDC1 è centrale nel controllo dei checkpoint in fase S e G2/M, nelle risposte allo stress replicativo e nel mantenimento della stabilità del genoma. Alterazioni della segnalazione di MDC1 sono state associate a fenotipi di instabilità genomica, frequentemente osservati nella biologia dei tumori e in altri disturbi legati alla riparazione del DNA.
MDC1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MDC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MDC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MDC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MDC1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.