MCM8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413655

Visão geral

MCM8 codifica uma proteína conservada de manutenção de minicromossomos que forma um complexo funcional com a MCM9 para promover a conclusão da replicação do DNA e o reparo mediado por recombinação homóloga, particularmente durante a recuperação do estresse replicativo. A MCM8 contribui para a ressecção das extremidades do DNA e para o processamento de forquilhas de replicação estagnadas ou colapsadas, relacionando-se assim à manutenção da estabilidade do genoma ao longo da fase S e em contextos de recombinação meiótica. A disrupção da função de MCM8 tem sido associada a comprometimento do reparo de quebras de dupla fita, aumento da instabilidade cromossômica e maior suscetibilidade a danos no DNA associados à replicação. Alterações genéticas em MCM8 foram relatadas em infertilidade e insuficiência ovariana prematura e também são relevantes para estudos mecanísticos de tumorigênese impulsionada por vias defeituosas de reparo do DNA.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MCM8 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MCM8 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MCM8, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MCM8 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MCM8.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MCM8 para a investigação da sinalização de MCM8, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MCM8 críticos para a função MCM8
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MCM8 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MCM8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MCM8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MCM8. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MCM8 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MCM8 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MCM8 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MCM8 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.