Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MCM2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400959-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MCM2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MCM2 Double-Nickase-Plasmid (h) und MCM2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MCM2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MCM2: sc-373702
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MCM2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400959-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCM2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400959-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MCM2 kodiert eine zentrale Untereinheit des Minichromosome-Maintenance-Helikasekomplexes (MCM2–7), der DNA-Replikationsursprünge lizenziert und während der S-Phase das Fortschreiten der Replikationsgabel vorantreibt. Durch das koordinierte Zusammenspiel mit CDC45 und dem GINS-Komplex unterstützt MCM2 den Aufbau des Replisoms, Replikationsstress-Antworten sowie die Kopplung der DNA-Synthese an Checkpoint-Signalwege. Eine Störung oder fehlregulierte Expression von MCM2 kann die Genomstabilität beeinträchtigen, Replikationsstress erhöhen und Programme der Zellzyklus-Kontrolle verändern, wie sie häufig bei proliferativen Erkrankungen untersucht werden. Als Marker für proliferierende Zellen wird MCM2 широко verwendet, um Replikationsdynamiken, chromatin-gebundene Lizenzierungszustände und Mechanismen der DNA-Schadentoleranz zu untersuchen.
MCM2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MCM2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MCM2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MCM2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MCM2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.