MC3-R Double Nickase Plasmid (h): sc-403341-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MC3-R Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MC3-R Double-Nickase-Plasmid (h) und MC3-R Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MC3R abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MC3-R Double Nickase Plasmid (h) | sc-403341-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MC3-R Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403341-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MC3R kodiert den Melanocortin-3-Rezeptor (MC3-R), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der hauptsächlich durch Melanocortin-Peptide wie α‑MSH aktiviert wird. MC3-R koppelt vor allem an Gs und stimuliert dadurch die Adenylylcyclase sowie die cAMP/PKA-Signalübertragung; so integriert er neuroendokrine Signale, die die Energiehomöostase, die Nährstoffverteilung und ernährungsbezogene Verhaltensweisen regulieren. In metabolischen Geweben und im zentralen Nervensystem überschneidet sich die MC3-R-Signalgebung mit hypothalamischen Schaltkreisen, die Appetit und die zirkadian gekoppelte Energiebilanz steuern. Genetische und funktionelle Störungen von MC3R wurden mit adipositasassoziierten Phänotypen und einer veränderten metabolischen Regulation in Verbindung gebracht, wodurch es ein relevantes Ziel für mechanistische Studien in Stoffwechsel- und Neurobiologieforschung darstellt.
MC3-R Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MC3R-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MC3R abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MC3R-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MC3R-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.