MBLAC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406416

Übersicht

MBLAC2 kodiert ein Protein mit einer Metallo-β-Laktamase-Domäne, das an metallabhängigen hydrolytischen Reaktionen und zellulären Entgiftungsprozessen beteiligt ist. Die vorhergesagte enzymatische Aktivität spricht für eine Rolle bei der Regulation des Stoffwechsels kleiner Moleküle und der Aufrechterhaltung der zellulären Homöostase unter Bedingungen von oxidativem Stress oder Xenobiotika-Belastung. Eine veränderte Expression von Mitgliedern der Metallo-β-Laktamase-Familie wurde in verschiedenen Krankheitskontexten beschrieben, was die Untersuchung von MBLAC2 in Signalwegen nahelegt, die mit Stressantworten, metabolischer Umprogrammierung und Zellüberleben verknüpft sind. Funktionsstudien zu MBLAC2 können aufzeigen, wie metallohydrolase-assoziierte Prozesse mit mitochondrialen und zytosolischen Stoffwechselnetzwerken in menschlichen Zellen zusammenwirken.

Das MBLAC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MBLAC2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MBLAC2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MBLAC2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MBLAC2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MBLAC2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MBLAC2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MBLAC2-Exone abzielen, die für die MBLAC2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MBLAC2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MBLAC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MBLAC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MBLAC2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MBLAC2 HDR-Plasmid (h) und MBLAC2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MBLAC2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MBLAC2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.