Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MaxiKβ Double Nickaseプラスミド (h): sc-403096-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MaxiKβ Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MaxiKβダブルニカースプラスミド（h）およびMaxiKβダブルニカースプラスミド（h2）は、KCNMB1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: MaxiKβ 抗体 (A-5): sc-377023
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MaxiKβ Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403096-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MaxiKβ Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403096-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNMB1は、大コンダクタンス型でCa²⁺および電位依存的に活性化されるカリウム（BK/MaxiK）チャネルのβ1調節サブユニットをコードしており、見かけのCa²⁺感受性を高めることでチャネルのゲーティングを調整し、膜の再分極の形成に関与します。ヒトの平滑筋やその他の興奮性組織では、MaxiKβ1が細胞内Ca²⁺シグナルをカリウム流出へと結び付け、膜電位のフィードバック制御を介して血管緊張、気道収縮性、神経発火に影響します。この調節機能により、KCNMB1はCa²⁺依存性シグナル伝達、電気機械的結合、そしてイオンチャネル制御へと収束する一酸化窒素（NO）/cGMP応答性経路と関連付けられます。BKチャネルβ1の機能変化は、血圧調節、平滑筋の過反応性、興奮性異常の疾患文脈で研究されており、KCNMB1はイオンチャネルの機序研究に有用な標的となっています。
MaxiKβ ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KCNMB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KCNMB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KCNMB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KCNMB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。