MaxiKβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403096

概要

KCNMB1は、大コンダクタンスのCa²⁺および電位依存性カリウム（BK/MaxiK）チャネルのβ1調節サブユニット（一般にMaxiKβと呼ばれる）をコードしている。MaxiKβはBKチャネルのCa²⁺感受性を高め、ゲーティング動態を変化させることで、膜興奮性、細胞内Ca²⁺動態、ならびに平滑筋トーヌスを規定する。この調節作用は、血管反応性、気道収縮性、腎における電解質ハンドリングを制御する経路に組み込まれ、NO/cGMP連関シグナル伝達やCa²⁺依存性プロセスに下流影響を及ぼす。KCNMB1の機能または発現の変化は、血圧調節の破綻、平滑筋の過収縮表現型、さらに広範な興奮性関連疾患と関連づけられている。

MaxiKβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKCNMB1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KCNMB1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KCNMB1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MaxiKβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MaxiKβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KCNMB1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MaxiKβの機能に不可欠なKCNMB1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KCNMB1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MaxiKβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMaxiKβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KCNMB1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MaxiKβ HDRプラスミド（h）および MaxiKβ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKCNMB1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKCNMB1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。