Partículas Lentivirales de Activación (h) MaxiKα: sc-402208-LAC

KCNMA1 codifica la subunidad α formadora del poro del canal de potasio MaxiKα (BK), de gran conductancia y activado por calcio y voltaje. Este canal acopla las señales intracelulares de Ca²⁺ y la despolarización de la membrana con el eflujo de K⁺, modulando la repolarización del potencial de acción, la frecuencia de disparo y la poshiperpolarización en tejidos excitables. La actividad de MaxiKα se integra con vías de señalización dependientes de Ca²⁺ y de homeostasis iónica para regular el tono del músculo liso, la excitabilidad neuronal y la secreción. La función o expresión desregulada de KCNMA1 se ha vinculado a trastornos que implican cambios en la excitabilidad y la contractilidad, incluidos fenotipos del neurodesarrollo, susceptibilidad a convulsiones y disfunción del músculo liso vascular o de las vías respiratorias, lo que respalda estudios mecanísticos en modelos celulares relevantes.

Las partículas de activación lentiviral MaxiKα (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de KCNMA1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MaxiKα (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción KCNMA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MaxiKα. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo KCNMA1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.