Matriptase-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410357-ACT

TMPRSS6 codifica a matriptase-2, uma protease de serina transmembranar do tipo II enriquecida no fígado, que atua como um importante regulador negativo da homeostase sistêmica do ferro. A matriptase-2 suprime a expressão de hepcidina ao modular proteoliticamente o eixo de sinalização hemojuvelina (HJV)/BMP-SMAD, influenciando assim a exportação de ferro mediada pela ferroportina e a saturação da transferrina. Por meio dessa via, o TMPRSS6 integra a proteólise extracelular ao controle transcricional de genes do metabolismo do ferro. A desregulação genética ou funcional de TMPRSS6 está fortemente associada a fenótipos de restrição de ferro impulsionados pela hepcidina, tornando-o um alvo central para estudos mecanísticos da regulação do ferro e da eritropoiese.

Matriptase-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMPRSS6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Matriptase-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMPRSS6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMPRSS6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Matriptase-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMPRSS6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Matriptase-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Matriptase-2 em células tumorais com expressão de TMPRSS6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.