Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
MAT IIα Double Nickase Plasmid (h): sc-402566-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MAT IIα Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MAT IIα Double-Nickase-Plasmid (h) und MAT IIα Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MAT2A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MAT II: sc-398917
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MAT IIα Double Nickase Plasmid (h) | sc-402566-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MAT IIα Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402566-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAT2A kodiert die katalytische α‑Untereinheit der Methionin‑Adenosyltransferase II (MAT IIα), die S‑Adenosyl‑L‑methionin (SAM) synthetisiert, den wichtigsten Methylgruppendonor für DNA‑, RNA‑ und Histon‑Methylierungsreaktionen. Durch die Steuerung der intrazellulären SAM‑Verfügbarkeit verknüpft MAT IIα den Methioninzyklus und den Ein‑Kohlenstoff‑Stoffwechsel mit epigenetischer Regulation, der Polyaminbiosynthese und dem Redoxgleichgewicht über die Transsulfurierung. Die MAT2A‑Aktivität ist eng an Proliferationsprogramme und nährstoffsensitive Zustände gekoppelt und ist daher relevant für Studien zur metabolischen Anpassung und zur chromatinabhängigen Genregulation. Eine veränderte MAT2A‑Expression oder -Abhängigkeit wurde in mehreren Krankheitskontexten beschrieben, darunter der Krebsstoffwechsel und leberbezogene Pathophysiologie, was seine Nutzung als molekularen Ansatzpunkt zur Untersuchung methylierungsgetriebener Phänotypen unterstützt.
MAT IIα Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MAT2A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MAT2A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MAT2A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MAT2A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.