MAT IIα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402566-ACT

MAT2A codifica a subunidade alfa catalítica da metionina adenosiltransferase II (MAT IIα), uma enzima-chave que gera S-adenosilmetionina (SAM), o principal doador de grupos metil para a metilação de DNA, RNA e histonas, bem como para outras reações dependentes de metiltransferases. Ao controlar a disponibilidade de SAM, a MAT IIα conecta o metabolismo de um carbono e o ciclo da metionina à regulação epigenética, ao estado da cromatina e a programas de transcrição que influenciam proliferação, diferenciação e respostas ao estresse. A atividade de MAT2A é estreitamente acoplada ao estado nutricional e ao balanço redox celular, integrando sinais metabólicos com a sinalização dependente de metilação. A desregulação de MAT2A e da homeostase de SAM tem sido associada a paisagens epigenéticas alteradas e à adaptação metabólica em contextos relevantes para doenças, tornando-a um ponto útil para estudos mecanísticos de metilação e da comunicação cruzada entre metabolismo e epigenética.

MAT IIα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAT2A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAT IIα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAT2A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAT2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAT IIα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAT2A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAT IIα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAT IIα em células tumorais com expressão de MAT2A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.