MAT Iα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419102

Übersicht

Mat1a kodiert die Methionin-Adenosyltransferase I alpha (MAT Iα), das wichtigste hepatische Enzym, das die Synthese von S‑Adenosyl‑L‑methionin (SAM) katalysiert – dem zentralen Methylgruppendonor für Methylierungsreaktionen an DNA, RNA, Proteinen und Lipiden. Über die Steuerung des SAM/SAH-Gleichgewichts verknüpft MAT Iα den Methioninstoffwechsel mit dem Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel, der Transsulfurierung und der Redoxhomöostase und beeinflusst damit die epigenetische Regulation sowie die globale Methylierungskapazität. Eine veränderte MAT1A-Aktivität ist mit gestörten, methylierungsabhängigen Genexpressionsprogrammen und metabolischen Stressantworten assoziiert, was sie für Studien zur Leberphysiologie, zur Hepatozytendifferenzierung und zu Mechanismen metabolischer Fehlfunktionen relevant macht.

Das MAT Iα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Mat1a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Mat1a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Mat1a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MAT Iα-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Mat1a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MAT Iα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Mat1a-Exone abzielen, die für die MAT Iα-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Mat1a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MAT Iα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom MAT Iα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Mat1a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MAT Iα HDR-Plasmid (m) und MAT Iα HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Mat1a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Mat1a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.