MARCKS Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400837-NIC

O substrato da proteína quinase C rico em alanina e miristoilado (MARCKS) é uma proteína associada à membrana, regulada por PKC, que se liga à actina e coordena a remodelação do citoesqueleto, o tráfego de membrana e a sinalização por fosfoinositídeos por meio de fosforilação reversível e ligação à calmodulina. Ao sequestrar e libertar PIP2 na membrana plasmática, o MARCKS influencia vias que controlam a polaridade celular, a motilidade, a endocitose e a exocitose, com efeitos a jusante em processos ligados a MAPK e a GTPases da família Rho. A atividade do MARCKS é frequentemente estudada no contexto do desenvolvimento neuronal e da plasticidade sináptica, bem como da ativação e secreção de células imunitárias. A expressão ou fosforilação desregulada de MARCKS tem sido associada a fenótipos migratórios e invasivos alterados em modelos de cancro e a mecanismos de doença inflamatória e do neurodesenvolvimento, sustentando a sua relevância como um nó funcional em redes de sinalização.

MARCKS O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MARCKS em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MARCKS. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MARCKS. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MARCKS interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.