MARCH11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-416041

概要

MARCH11は、膜関連型RING-CH（MARCH）ファミリーに属するE3ユビキチンリガーゼをコードしており、主にエンドソーム膜および分泌系膜に局在して、選択的な膜貫通タンパク質のユビキチン化依存的なソーティングを促進します。エンドサイトーシスおよびリソソーム分解経路を介したカーゴ輸送を制御することで、MARCH11は細胞表面タンパク質の組成や細胞内膜ダイナミクスの形成に寄与します。この作用により、MARCH11はユビキチン–プロテアソーム系およびエンドリソソームネットワークのより広範な制御とも関連づけられ、これらの過程は免疫制御、細胞ストレス応答、腫瘍化シグナル伝達に関与することが多いとされています。さらに、ユビキチン化や膜タンパク質ターンオーバーの破綻は、受容体シグナルの変調やプロテオスタシス異常とも結びつき、がん生物学を含むさまざまな疾患文脈で重要です。

MARCH11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMARCH11遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MARCH11内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MARCH11のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MARCH11タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MARCH11シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MARCH11欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MARCH11の機能に不可欠なMARCH11エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MARCH11ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MARCH11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMARCH11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MARCH11遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MARCH11 HDRプラスミド（h）および MARCH11 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMARCH11ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMARCH11標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。