MARCH11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416041

Übersicht

MARCH11 kodiert eine membranassoziierte E3-Ubiquitin-Ligase der RING-CH-(MARCH)-Familie, die überwiegend an endosomalen und sekretorischen Membranen lokalisiert ist, wo sie die ubiquitinierungsabhängige Sortierung ausgewählter Transmembranproteine fördert. Durch die Regulation des Cargo-Transports über Endozytose- und lysosomale Abbauwege trägt MARCH11 zur Zusammensetzung von Proteinen an der Zelloberfläche und zur Dynamik intrazellulärer Membranen bei. Diese Aktivität verknüpft MARCH11 mit der übergeordneten Kontrolle des Ubiquitin–Proteasom- sowie des endolysosomalen Netzwerks – Prozesse, die häufig mit Immunregulation, zellulären Stressantworten und onkogener Signalübertragung in Zusammenhang stehen. Eine fehlregulierte Ubiquitinierung und der Umsatz von Membranproteinen sind zudem mit veränderter Rezeptorsignalgebung und Defekten der Proteostase assoziiert, die für die Krebsbiologie und andere Krankheitskontexte relevant sind.

Das MARCH11 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MARCH11-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MARCH11-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MARCH11 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MARCH11-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MARCH11-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MARCH11-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MARCH11-Exone abzielen, die für die MARCH11-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MARCH11-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MARCH11 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MARCH11 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MARCH11-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MARCH11 HDR-Plasmid (h) und MARCH11 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MARCH11-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MARCH11-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.