mAChR M2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402394-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das mAChR M2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- mAChR M2 Double-Nickase-Plasmid (h) und mAChR M2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHRM2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: mAChR M2: sc-33712
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
mAChR M2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402394-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mAChR M2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402394-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRM2 kodiert den humanen muskarinischen Acetylcholinrezeptor M2 (mAChR M2), einen Gi/o-gekoppelten GPCR, der die Adenylylcyclase-Aktivität dämpft, die cAMP/PKA-Signalübertragung senkt und durch Modulation der Ionenkanal-Leitfähigkeit die zelluläre Erregbarkeit und Sekretion reguliert. Im Herzgewebe trägt er zur parasympathischen Kontrolle der Herzfrequenz und der atrioventrikulären Überleitung bei, während er im zentralen Nervensystem die synaptische Transmission und Netzwerkaktivität mitprägt. Nachgeschaltete Signalwege überschneiden sich mit MAPK- und PI3K-assoziierten Pfaden und können die Calcium-Homöostase sowie die Neurotransmitterfreisetzung beeinflussen. Eine veränderte CHRM2-Expression oder -Signalgebung wurde in Zusammenhängen wie arrhythmiebezogener Physiologie, neuropsychiatrischen Phänotypen und tumorassoziierten cholinergen Signalnetzwerken untersucht.
mAChR M2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHRM2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHRM2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHRM2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHRM2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.