LYVE-1CRISPR激活质粒(h): sc-401446-ACT

LYVE1 编码淋巴管内皮透明质酸受体 1（LYVE-1），这是一种 I 型膜糖蛋白，能够结合透明质酸，并有助于维持淋巴内皮细胞身份、介导细胞外基质相互作用以及参与白细胞运输。LYVE-1 常被用作淋巴内皮标志物，在某些特化的巨噬细胞群体中也可检测到，从而支持对组织液体稳态与免疫细胞迁移的研究。通过透明质酸依赖的黏附以及与内吞相关的过程，LYVE-1 将糖萼重塑与血管及基质微环境的动态变化联系起来。LYVE1 表达模式的失调常在淋巴管生成、慢性炎症以及肿瘤相关淋巴管重塑等背景下被研究，用于阐明与转移相关的潜在途径机制，但不暗示临床结局。

LYVE-1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性LYVE1的表达。

LYVE-1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的LYVE1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于LYVE1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性LYVE-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的LYVE1位点，并能够研究内源性位点上依赖于LYVE-1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在LYVE1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟LYVE-1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。