Ly-GDI/RhoGDI2/ARHGDIB Double Nickaseプラスミド (h): sc-402326-NIC

ARHGDIB は Ly-GDI/RhoGDI2 をコードしており、これは Rho GDP 解離阻害因子（Rho GDI）として、RAC1、RHOA、CDC42 などのプレニル化された Rho ファミリー GTP アーゼに結合し、それらの膜局在、活性化サイクル、細胞内輸送を制御します。Rho GTP アーゼシグナル伝達を調節することで、Ly-GDI はアクチン細胞骨格の再構築、細胞接着と遊走、小胞輸送、ならびに NADPH オキシダーゼに関連した免疫細胞機能に影響を与えます。そのため ARHGDIB の活性は、白血球の走化性、炎症シグナル、バリアとの相互作用を司る経路と密接に結び付いています。Rho GTP アーゼ制御や ARHGDIB 発現の破綻は、血液学および炎症研究の文脈において、免疫細胞の挙動変化や疾患関連表現型と関連付けられています。

Ly-GDI/RhoGDI2/ARHGDIB ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ARHGDIB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ARHGDIB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ARHGDIBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ARHGDIBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。