Ly-6K Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404264-ACT

O gene humano LY6K codifica a proteína Ly-6K, uma proteína de superfície da família Ly6/uPAR ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI), implicada na sinalização célula–célula e na organização de microdomínios de membrana. A expressão de Ly-6K tem sido associada à regulação do comportamento de células epiteliais, incluindo migração e fenótipos invasivos, e é frequentemente estudada em contextos de programas gênicos associados a tumores e de interações microambientais relacionadas ao sistema imune. Como molécula de superfície celular, Ly-6K é relevante para vias que governam adesão, comunicação cruzada entre receptores e a remodelação de redes de sinalização que influenciam proliferação e sobrevivência. Seu perfil de expressão restrito em muitos tecidos normais e a expressão elevada em diversos cânceres tornam o LY6K um marcador útil e um nó funcional para pesquisas mecanísticas em oncologia e estudos de biomarcadores.

Ly-6K O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LY6K sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ly-6K O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LY6K em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LY6K, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ly-6K. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LY6K nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ly-6K no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ly-6K em células tumorais com expressão de LY6K silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.