LTBP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402289
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- LTBP-1 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im LTBP-1-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LTBP-1: sc-271140
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LTBP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-402289 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
LTBP1 kodiert das latente Transforming-Growth-Factor-β-Bindungsprotein 1 (LTBP-1), ein Glykoprotein der extrazellulären Matrix, das an den latenten TGF-β-Komplex bindet und dessen Sequestrierung, Aktivierung und räumliche Präsentation für Zellen reguliert. Durch die Kontrolle der TGF-β-Bioverfügbarkeit beeinflusst LTBP-1 die SMAD-abhängige Signalübertragung und nachgeschaltete Programme der Matrixremodellierung, der epithelial-mesenchymalen Transition, der Zelladhäsion und der Gewebehomöostase. Die Funktion von LTBP1 ist eng mit der Organisation von Fibrillin-Mikrofibrillen und der mechanoregulierten TGF-β-Aktivierung verknüpft und verbindet damit die Architektur der extrazellulären Matrix mit der Zytokinsignalisierung. Eine fehlregulierte Aktivität der LTBP1/TGF-β-Achse wird mit fibroseassoziiertem Remodeling, krebsassoziierter stromaler Signalgebung sowie vaskulärer bzw. bindegewebiger Pathobiologie in Zusammenhang gebracht und ist daher relevant für mechanistische Studien mikroenvironmentgetriebener Phänotypen.
Das LTBP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LTBP1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LTBP1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LTBP1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LTBP-1-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LTBP1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LTBP-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf LTBP1-Exone abzielen, die für die LTBP-1-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere LTBP1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom LTBP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LTBP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LTBP1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LTBP-1 HDR-Plasmid (h) und LTBP-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LTBP1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LTBP1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.