LRRC50 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407107

Übersicht

DNAAF1 (LRRC50) kodiert ein leucinreiches Repeat-Protein, das für die zytoplasmatische Vorassemblierung axonemaler Dyneinarme erforderlich ist – ein entscheidender Schritt in der Biogenese motiler Zilien. Es unterstützt die Reifung und den Transport des Dynein-Motorkomplexes vor dessen Einbau in das Axonem und reguliert dadurch den Zilienschlag sowie die mukoziliäre Clearance. Eine Störung von DNAAF1 beeinträchtigt die Bildung äußerer und innerer Dyneinarme und schwächt den ziliengetriebenen Flüssigkeitsstrom. Pathogene Varianten sind mit primärer ziliärer Dyskinesie mit Lateralisierungsdefekten assoziiert, wodurch DNAAF1 ein relevantes Ziel für die Erforschung von Ziliopathien und zilienabhängigen Entwicklungsprogrammen darstellt.

Das LRRC50 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DNAAF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DNAAF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DNAAF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LRRC50-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DNAAF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LRRC50-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DNAAF1-Exone abzielen, die für die LRRC50-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DNAAF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LRRC50 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LRRC50 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DNAAF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LRRC50 HDR-Plasmid (h) und LRRC50 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DNAAF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DNAAF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.