LRP130 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402029-LAC

LRPPRC codifica LRP130, una proteina legante l’RNA associata ai mitocondri che coordina la regolazione post-trascrizionale dell’espressione genica dell’organello stabilizzando e processando gli mRNA mitocondriali e promuovendone la poliadenilazione e la traduzione. Attraverso queste attività, LRP130 sostiene la biogenesi dei complessi della fosforilazione ossidativa, la funzione del ribosoma mitocondriale e un controllo più ampio del metabolismo energetico cellulare. Le vie dipendenti da LRPPRC interagiscono con la comunicazione mitonucleare, il rimodellamento della respirazione adattativo allo stress e il metabolismo dell’RNA all’interno dei mitocondri. Alterazioni della funzione di LRPPRC sono state collegate a fenotipi di disfunzione mitocondriale e a contesti di patologie neuro-metaboliche, rendendolo un bersaglio utile per studi di bioenergetica e di regolazione dell’espressione genica mitocondriale.

Le particelle di attivazione lentivirale LRP130 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di LRPPRC in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale LRP130 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione LRPPRC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di LRP130. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo LRPPRC e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.