LRP CRISPR Activation Plasmid (m): sc-429657-ACT

Mouse Mvp kodiert LRP (Major Vault Protein), die wichtigste strukturelle Komponente von Vault-Ribonukleoproteinpartikeln, die an zytoplasmatischem Transport, nukleozytoplasmatischem Transport und stressresponsiver Signalübertragung beteiligt sind. LRP interagiert mit Signalwegen, die die Verarbeitung von Xenobiotika und die zelluläre Homöostase regulieren, einschließlich Arzneistofftransport- und Entgiftungsprozessen, und wurde in manchen Kontexten mit der Modulation von PI3K/AKT- und MAPK-assoziierten Antworten in Verbindung gebracht. Eine veränderte MVP/LRP-Expression wird mit Phänotypen der Multidrug-Resistenz und Veränderungen der Apoptoseempfindlichkeit assoziiert, was sie für Studien zur Anpassung von Tumorzellen und zum Ansprechen auf Therapien relevant macht. In Immun- und Epithel-Systemen ist die Vault-Partikel-Biologie zudem mit Programmen der angeborenen Abwehr und entzündungsbezogener Signalgebung verknüpft, was Untersuchungen in Krebs- und Wirtsantwort-Modellen unterstützt.

LRP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Mvp-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LRP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Mvp-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Mvp-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LRP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Mvp-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LRP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LRP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Mvp-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.