LRP Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429657-ACT

Mouse Mvp codifica a LRP (proteína principal do vault), o principal componente estrutural das partículas ribonucleoproteicas do tipo vault, implicadas no tráfego citoplasmático, no transporte nucleocitoplasmático e na sinalização responsiva ao estresse. A LRP interage com vias que regulam o manejo de xenobióticos e a homeostase celular, incluindo processos de transporte e desintoxicação de fármacos, e, em alguns contextos, tem sido associada à modulação de respostas ligadas a PI3K/AKT e MAPK. Alterações na expressão de MVP/LRP têm sido associadas a fenótipos de resistência a múltiplos fármacos e a mudanças na sensibilidade à apoptose, tornando-a relevante para estudos de adaptação de células tumorais e de resposta ao tratamento. Em sistemas imunes e epiteliais, a biologia das partículas vault também se relaciona a programas de defesa inata e à sinalização associada à inflamação, dando suporte a investigações em modelos de câncer e de resposta do hospedeiro.

LRP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mvp sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LRP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mvp em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mvp, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LRP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mvp nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LRP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LRP em células tumorais com expressão de Mvp silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.