LRP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401589-ACT

A proteína major vault (MVP), também conhecida como proteína relacionada à resistência pulmonar (LRP), é o principal componente estrutural das partículas ribonucleoproteicas do tipo vault, que participam do transporte intracelular, da integração de sinais e da adaptação ao estresse celular. A MVP/LRP humana tem sido associada à regulação do tráfego nucleocitoplasmático e da dinâmica vesicular, e interage com redes de sinalização de sobrevivência e inflamação, incluindo processos associados a PI3K–AKT, MAPK e NF-κB. A expressão alterada de MVP é frequentemente estudada em contextos de resposta a fármacos, estresse oxidativo e modulação imune, e tem sido relatada em diversos cenários de pesquisa em câncer e neuroinflamação. Essas propriedades fazem da MVP/LRP um alvo útil para dissecar mecanismos de proteostase, desintoxicação celular e reprogramação de vias sob estresse.

LRP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MVP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LRP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MVP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MVP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LRP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MVP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LRP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LRP em células tumorais com expressão de MVP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.