LOX CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421456

概要

マウスLoxはリシルオキシダーゼ（LOX）をコードしており、LOXは分泌型の銅依存性アミン酸化酵素としてコラーゲンおよびエラスチンの共有結合性クロスリンク形成を触媒し、細胞外マトリックス（ECM）の成熟と組織の生体力学的完全性を制御します。LOX活性はECMリモデリングを形成し、細胞—マトリックス接着や細胞移動を調節するとともに、インテグリン／FAKおよびその下流のMAPK経路を含む、線維化やメカノトランスダクションに関連するシグナル伝達回路にも影響を与えます。LOXの発現または活性の破綻は、線維性疾患、血管病変、腫瘍関連間質の変化で観察される異常なマトリックスの硬化やリモデリングと関連しており、Loxは微小環境駆動性の表現型を研究するうえで有用な結節点となります。

LOX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLox遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lox内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Loxのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LOXタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LOXシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lox欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LOXの機能に不可欠なLoxエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Loxゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LOX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLOX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lox遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LOX HDRプラスミド（m）および LOX HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLoxホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLox標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。