LONP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411273-ACT

LONP1は、ミトコンドリア基質に局在するAAA+ Lonプロテアーゼをコードしており、損傷タンパク質やミスフォールドタンパク質をATP依存的にアンフォールディングしたうえで分解へと結び付ける、ミトコンドリアのタンパク質品質管理機構の中核因子です。呼吸鎖サブユニットやミトコンドリアヌクレオイド関連因子のターンオーバーを制御することで、LONP1は酸化的リン酸化、ミトコンドリアDNAの維持、ならびに統合的ミトコンドリアストレス応答を支えています。さらにLONP1活性は、プロテオスタシス、ROS恒常性、アポトーシスを司る経路と交差しており、ミトコンドリア機能障害を代謝変化や細胞運命決定と結び付けます。LONP1の発現や機能の破綻はミトコンドリア・プロテオパチー様の表現型と関連することが示されており、神経変性、がん細胞における代謝リモデリング、遺伝性ミトコンドリア疾患の機序といった文脈で頻繁に研究されています。

LONP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LONP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LONP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LONP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLONP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LONP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLONP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLONP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLONP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLONP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。