LNX3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403866-ACT

PDZRN3はLNX3をコードしており、LNX3は複数のPDZドメインとRING型ドメインをもつE3ユビキチンリガーゼで、タンパク質間相互作用の調整や、ユビキチン依存的なシグナル伝達構成因子の分解（ターンオーバー）に関与します。足場（スキャフォールド）を介した複合体形成とユビキチン化を通じて、LNX3は受容体輸送や、それに続く転写プログラムの制御に関与し、細胞極性、分化、組織リモデリングを形作ると考えられています。成長因子シグナルやWnt/平面内細胞極性（PCP）シグナルを司る経路との関連が報告されており、発生パターニングや細胞骨格の組織化における役割が示唆されています。PDZRN3/LNX3の発現異常は、複数の疾患関連の文脈において増殖・分化状態の変化と関連づけられており、経路に焦点を当てた研究における機構的ノードとしての利用を支持します。

LNX3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PDZRN3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LNX3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PDZRN3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPDZRN3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LNX3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPDZRN3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLNX3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPDZRN3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLNX3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。