LMO2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421447

Panoramica

Lmo2 codifica LIM domain only 2 (LMO2), una proteina adattatrice nucleare che assembla complessi trascrizionali multiproteici che controllano la specificazione di linea e la differenziazione, in particolare nei compartimenti ematopoietico ed endoteliale. Collegando fattori di trascrizione che legano il DNA e cofattori, LMO2 influenza programmi legati al mantenimento di cellule staminali/progenitrici, all’espressione di geni angiogenici e allo sviluppo eritroide. Un’espressione deregolata di LMO2 o una composizione alterata dei complessi è associata a un’emopoiesi anomala e a stati trascrizionali oncogenici, rendendolo un bersaglio frequente negli studi sulla leucemogenesi e sulla biologia vascolare. I modelli murini di Lmo2 sono quindi ampiamente utilizzati per analizzare l’architettura delle reti trascrizionali, la regolazione dipendente dagli enhancer e le decisioni di destino durante lo sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LMO2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lmo2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lmo2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lmo2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LMO2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lmo2 per lo studio della segnalazione di LMO2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lmo2 critici per la funzione di LMO2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lmo2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LMO2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LMO2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lmo2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LMO2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LMO2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lmo2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lmo2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.