LIFR Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421433-ACT

Lifr codifica o receptor do fator inibidor de leucemia (LIFR), um receptor de citocinas que forma um complexo de sinalização com a gp130 para transduzir ligantes da família LIF. A ligação do ligante ativa as vias JAK/STAT, MAPK/ERK e PI3K/AKT, coordenando programas transcricionais que regulam decisões de destino celular, sobrevivência e diferenciação em múltiplos tecidos. Em sistemas murinos, a sinalização via LIFR é amplamente utilizada para estudar a biologia de células-tronco e progenitoras, processos do neurodesenvolvimento e a homeostase tecidual. A atividade desregulada da via LIFR tem sido associada a fenótipos relacionados a anomalias do desenvolvimento, sinalização inflamatória e programas oncogênicos, reforçando sua utilidade como um nó mecanístico em redes de sinalização relevantes para doenças.

LIFR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Lifr sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LIFR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Lifr em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Lifr, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LIFR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Lifr nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LIFR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LIFR em células tumorais com expressão de Lifr silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.