LI-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419592
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- LI-cadherin Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im LI-cadherin-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LI-cadherin: sc-393533
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LI-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-419592 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Cdh17 kodiert LI-Cadherin, ein calciumabhängiges Zell-Zell-Adhäsionsmolekül aus der Cadherin-Superfamilie, das zur epithelialen Kohäsion und Polarität in gastrointestinalen sowie hepatobiliären Geweben beiträgt. Durch homophile Adhäsion an der Zelloberfläche hilft LI-Cadherin, die Architektur von Zellkontakten zu organisieren, reguliert die Barriereintegrität und beeinflusst die kontaktabhängige Kontrolle von Zellmigration und -differenzierung. Veränderte cadherinvermittelte Adhäsion steht mit epithelialem Remodeling, Dysplasie und invasionsassoziierten Phänotypen in Zusammenhang, wodurch Cdh17 einen nützlichen Ansatzpunkt bietet, um die Stabilität von Zellkontakten während Entzündung und tumorassoziierter Progression in der Maus zu untersuchen. Sein Expressionsmuster und seine Adhäsionsfunktion stützen zudem den Einsatz als markergekoppeltes Ziel in Studien zur Identität epithelialer Zelllinien und zur Gewebeorganisation.
Das LI-cadherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cdh17-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cdh17-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cdh17 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LI-cadherin-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cdh17-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LI-cadherin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Cdh17-Exone abzielen, die für die LI-cadherin-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cdh17-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom LI-cadherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LI-cadherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cdh17-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LI-cadherin HDR-Plasmid (m) und LI-cadherin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cdh17-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cdh17-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.